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1.吸收光譜法
朗伯定律(1760年):物質(zhì)對光的吸收與物質(zhì)厚度成正比:A=f(b)
比耳定律(1852年):物質(zhì)對光的吸收與物質(zhì)濃度成正比:A=f(c)
朗伯-比爾定律:A=log(I/I0)=e*C*l當一束平行單色光垂直通過(guò)均勻、透明的吸光物質(zhì)的稀溶液時(shí),溶液對光的吸收程度與溶液的濃度及液層的厚度成正比。
2.透射比濁法
懸浮液和膠體溶液都具有向四面八方散射入射光的性質(zhì),當一束平行光通過(guò)含有懸浮質(zhì)點(diǎn)的懸浮液或膠體溶液時(shí),同時(shí)受到散射和吸收兩個(gè)因素的影響,使光的強度減弱。
在光源的光路方向上測量透射光(實(shí)際上包括散射光)強度與入射光強度比值,并通過(guò)該比值測定出懸浮液或膠體溶液中質(zhì)點(diǎn)的溶度,稱(chēng)為透射比濁法。
該法可以與吸收光譜法共用一個(gè)檢測器,所以生化分析儀不需增加任何部件,均可利用此法進(jìn)行測定。
3.終點(diǎn)法:指經(jīng)過(guò)一段時(shí)間(一般為10分鐘左右)的反應,整個(gè)反應達到平衡,所有的被測定物已轉變?yōu)楫a(chǎn)物,反應液的吸光度不在增加(或降低),吸光度的增加(或降低)程度與被測定物的濃度成正比。
如:總膽紅素、結合膽紅素、血清總蛋白、血清白蛋白、總膽汁酸、葡萄糖、尿酸、總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白膽固醇、鈣、磷、鎂等。
4.固定時(shí)間法:指在一定的反應時(shí)間內,反應速度與反應物濃度的一次方成正比,由于反應物在不斷的消耗,因此整個(gè)反應速度在不斷的減小,表現為吸光度的增加(或降低)速度越來(lái)越小,由于這類(lèi)反應達到平衡的時(shí)間很長(cháng),必需在特定時(shí)間段內進(jìn)行監測。
如:肌酐等。
5.速率法:指連續測定(每15秒~1分鐘監測一次)被測物反應過(guò)程中某一反應產(chǎn)物或底物的濃度隨時(shí)間的變化,來(lái)求出被測物反應的初速度的方法,即連續監測法。
如:丙氨酸氨基轉移酶、天冬氨酸氨基轉移酶、乳酸脫氫酶、堿性磷酸酶、γ谷氨氨?;D移酶、淀粉酶和肌酸激酶等。
干式生化原理及試紙結構
6.干片式生化:反射光度法
80年代問(wèn)世,預先將反應所需的部分或全部試劑固定在具有特殊結構的載體中,將液體樣品加到載體上,待測物與載體中的試劑發(fā)生化學(xué)顯色反應,最后通過(guò)目測定性或半定性,或通過(guò)一定儀器檢測載體上信號的變化。
干式生化的檢測方法:反射光度法
顯色反應發(fā)生在固相載體,對透射光和反射光均有明顯的散射作用,不遵從朗伯-比爾定律,并且固相反應膜的上下界面之間存在多重內反射,使用庫貝卡-芒克理論,或以威廉姆斯-克拉珀方程予以修正。
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